■ 基本信息
啟動(dòng)子: | Trc |
復制子: | pBR322 |
終止子: | rrnB T2 |
質(zhì)粒分類(lèi): | 大腸桿菌載體；pTrc系列表達質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 4414bp |
質(zhì)粒標簽: | N-His，N-EK，N-Xpress |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養條件: | 37度，37℃，有氧，LB |
表達宿主: | 大腸桿菌 |
誘導方式: | IPTG或乳糖及其類(lèi)似物 |
5'測序引物: | pTrcHis-F: GAGGTATATATTAATGTATCG |
3'測序引物: | pTrcHis-R:GATTTAATCTGTATCAGG |
備注: | pTrc表達質(zhì)粒 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達 |
片段類(lèi)型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pTrcHis載體是來(lái)由pBR322質(zhì)粒衍生而來(lái)的表達載體,設計用來(lái)在大腸桿菌中進(jìn)行重組蛋白的高效表達和純化。載體上的Trc啟動(dòng)子和rrnB抗終止區使得高水平蛋白表達成為可能.Trc啟動(dòng)子由Trp啟動(dòng)子的-35區域和Lac啟動(dòng)子的-10區域共同組成。pTrcHis載體同時(shí)包含有一個(gè)LacIq基因，該基因編碼了Lac啟動(dòng)子的抑制蛋白。LacIq基因的存在使得宿主菌是LacIq+還是LacIq-都可以高效抑制插入基因的轉錄。進(jìn)行蛋白表達時(shí)，大腸桿菌需要生長(cháng)到對數生長(cháng)期，然后加入1mM IPTG，去除阻遏蛋白，誘導表達。載體上pTrcHis載體是來(lái)由pBR322質(zhì)粒衍生而來(lái)的表達載體,設計用來(lái)在大腸桿菌中進(jìn)行重組蛋白的高效表達和純化。載體上的Trc啟動(dòng)子和rrnB抗終止區使得高水平蛋白表達成為可能.Trc啟動(dòng)子由Trp啟動(dòng)子的-35區域和Lac啟動(dòng)子的-10區域共同組成。pTrcHis載體同時(shí)包含有一個(gè)LacIq基因，該基因編碼了Lac啟動(dòng)子的抑制蛋白。LacIq基因的存在使得宿主菌是LacIq+還是LacIq-都可以高效抑制插入基因的轉錄。進(jìn)行蛋白表達時(shí)，大腸桿菌需要生長(cháng)到對數生長(cháng)期，然后加入1mM IPTG，去除阻遏蛋白，誘導表達。載體上的迷你順?lè )醋咏Y構能夠增強插入基因的轉錄水平，從而高水平表達目的蛋白。DNA插入片段位于載體表達片段下游，在其上游有一個(gè)N-端融合表達多肽序列，該序列包含有ATG起始密碼子，6xHis標簽，T7噬菌體10號基因的翻譯增強子，X press抗原表位，腸激酶酶切識別位點(diǎn)的迷你順?lè )醋咏Y構，能夠增強插入基因的轉錄水平，從而高水平表達目的蛋白。DNA插入片段位于載體表達片段下游，在其上游有一個(gè)N-端融合表達多肽序列，該序列包含有ATG起始密碼子，6xHis標簽，T7噬菌體10號基因的翻譯增強子，X press抗原表位，腸激酶酶切識別位點(diǎn)。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請下載：
ZK1611 pTrcHisA大腸表達質(zhì)粒.txt
