■ 基本信息
別名: | pColdTF |
啟動(dòng)子: | CSPA |
復制子: | pBR322 |
質(zhì)粒分類(lèi): | 大腸系列質(zhì)粒；大腸表達質(zhì)粒；pCold系列質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 5769bp |
質(zhì)粒標簽: | N-His, N-Trigger factor, N-HRV 3C, N-Thrombin, N-Factor Xa |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養條件: | 37度 |
表達宿主: | BL21等大腸桿菌 |
培養條件: | 37℃，有氧，LB |
誘導方式: | IPTG或乳糖及其類(lèi)似物 |
5'測序引物: | pCold-TF-F1（CCACTTTCAACGAGCTGATG） |
3'測序引物:
| pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG） |
備注: | 冷啟動(dòng)表達質(zhì)粒 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達 |
片段類(lèi)型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
Takara的pCold TF載體是一種融合表達可溶性的標簽"觸發(fā)因子（Trigger Factor,TF）伴侶"的冷休克載體。"觸發(fā)因子"（48KD）是原核核糖體相關(guān)的分子伴侶蛋白（48 kDa），有利于新表達的多肽的共翻譯折疊。正因為它來(lái)源于大腸桿菌，保證了觸發(fā)因子能夠在大腸桿菌表達系統中高表達。 pCold TF載體由CSPA啟動(dòng)子及其下游的序列組成，其下游序列主要包括包括5'非翻譯區（5'非編碼區），翻譯增強元件（TEE），His標簽序列，多克隆位點(diǎn)（MCS）。Lac操縱子插入在CSPA啟動(dòng)子下游，以確保嚴格的表達調控。此外，HRV 3C蛋白酶，凝血酶，和Factor Xa識別位點(diǎn)位于“Trigger Factor”和多克隆位點(diǎn)（MCS）之間，以便表達的融合蛋白上將標簽去除。 大多數大腸桿菌菌株都可以可以作為本載體的表達宿主。pCold TF載體提供冷休克誘導的方法高水平表達目的蛋白，再加上觸發(fā)因子（伴侶）的表達來(lái)提高正確的蛋白質(zhì)折疊，從而實(shí)現高效可溶性表達其他系統中難以對付的蛋白。
pColdTF質(zhì)粒是利用冷休克基因CSPA啟動(dòng)子設計高效率蛋白質(zhì)表達載體。在E.COLI啟動(dòng)子下游處，插入了lac操縱子，以便嚴格控制表達。此外，5’非翻譯區（5’UTR），翻譯增強元件（TEE）,His標簽序列，Xa因子切割位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn)（MCS）位于CAPS啟動(dòng)子的下游。當培養溫度切換到低溫時(shí)，大腸桿菌暫時(shí)停止生長(cháng)，大部分的大腸桿菌蛋白質(zhì)表達減少，但是一類(lèi)稱(chēng)為冷休克蛋白的蛋白質(zhì)被特異性誘導表達。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請下載：
ZK1592 pCold TF大腸表達質(zhì)粒.txt
