■ 基本信息
啟動(dòng)子: | CMV |
復制子: | pUC |
終止子: | HSV TK poly(A) signal |
質(zhì)粒分類(lèi): | 哺乳細胞質(zhì)粒；哺乳編輯質(zhì)粒；干擾RNA質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 5759bp |
原核抗性: | Str |
真核抗性: | Blast |
克隆菌株: | DH5a |
培養條件: | 37℃，有氧，5%CO2 |
表達宿主: | 293T等哺乳細胞 |
誘導方式: | 無(wú)需誘導 |
5'測序引物: | pEGFP-C-5 |
3'測序引物: | HSVtk-pA-R：GTCTCCTTCCGTGTTTCAG |
備注: | 可連入miRNA片段 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 哺乳細胞 |
質(zhì)粒用途: | 轉錄調控 |
片段類(lèi)型: | miRNA
|
片段物種: |
|
原核抗性: | Str |
真核抗性: | Blast
|
熒光標記: | 綠色
|
■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pCDNA6.2-GW-EmGFP-miR-Control質(zhì)粒是在pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR線(xiàn)性化載體的基礎上連入了一個(gè)小片段而成。如果需要連入其它miRNA片段，可通過(guò)引物退火加酶切連接的方式連入。 轉染后可立即表達 miRNA。 所表達的 miRNA 在核內經(jīng)內源細胞機制（包括 Drosha 酶）加工后，轉運至細胞質(zhì)，由 Dicer 酶進(jìn)一步加工）。 然后，完成加工的 miRNA 結合到 RISC，在此處其功能類(lèi)似于 siRNA，使 mRNA 靶標被切割。
帶有 EmGFP 的 BLOCK-iT? Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒將傳統 RNAi 載體的優(yōu)點(diǎn)（表達穩定并能夠使用病毒導入）以及組織特異性表達和同一轉錄本多靶點(diǎn)抑制的功能集于一身。 帶有 EmGFP 的 BLOCK-iT? Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒含有的 pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR 載體設計用于表達人工 miRNA，該 miRNA 經(jīng)工程化改造，與目的基因序列有 100% 的同源性并能引起靶標分子的切割。 該載體包括內源性 miRNA 的側翼序列和環(huán)序列，內源性 miRNA 可指導從較長(cháng)的 Pol II 轉錄本 (pre-miRNA) 上切除工程化的 miRNA。 使用 一流的 BLOCK-iT RNAi Designer，超過(guò) 70% 的重組體能產(chǎn)生超過(guò) 70% 的抑制效率。 工程化 miRNA 的 Pol II 表達可實(shí)現：
在 CMV 即刻早期啟動(dòng)子作用下高效表達，可通過(guò) MultiSite Gateway重組選擇組織特異性啟動(dòng)子和其它受調控的啟動(dòng)子；
在 pcDNA?6.2-GW/EmGFP-miR 載體中同-順?lè )醋颖磉_ Emerald GFP (EmGFP) 報告基因，使 EmGFP 的表達與目的 miRNA 抑制活性之間具有極強的相關(guān)性；
與用于基因表達的多種 Invitrogen Gateway? 目的 (DEST) 載體兼容；包括用于穩定轉導分裂細胞、非分裂細胞和原代細胞類(lèi)型的慢病毒載體，用于染色體單位點(diǎn)整合的 Flp-In? 系統，以及替代報告基因融合構建體；
可在同一轉錄本表達的工程化 miRNA 多于一種，從而可同時(shí)抑制多個(gè)基因并產(chǎn)生合成表型；
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請下載：
ZK561pCDNA6.2-GWEmGFP-miR-Control哺乳調控質(zhì)粒.txt
