■ 基本信息
別名: | pET44a |
啟動(dòng)子: | T7 |
復制子: | pBR322 |
終止子: | T7 terminator |
質(zhì)粒分類(lèi): | 大腸桿菌載體；PET系列表達質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 7311bp |
質(zhì)粒標簽: | C-HSV, N-6×His, C-6×His, N-Thrombin, N-Nus, N-EK |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養條件: | 37℃，有氧，LB |
表達宿主: | BL21(DE3) |
誘導方式: | IPTG或乳糖及其類(lèi)似物 |
5'測序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
3'測序引物: | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達 |
片段類(lèi)型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pET44系列載體是設計用來(lái)克隆和高水平表達含有495個(gè)氨基酸的Nus標簽的蛋白表達載體。與pET-43.1系列載體相比，pET44系列載體額外編碼一個(gè)N端的His蛋白純化標簽。
pET42a載體的單一的多克隆位點(diǎn)見(jiàn)上面的環(huán)狀質(zhì)粒圖譜。注意：載體序列是以pBR322質(zhì)粒的編碼規矩進(jìn)行編碼的，所以T7蛋白表達區在質(zhì)粒圖譜上面 是反向的。T7 RNA聚合酶啟動(dòng)的克隆和表達區域在質(zhì)粒圖譜中也被標注了出來(lái)。質(zhì)粒的F1復制子是被定向的，所以在T7噬菌體聚合酶的作用下，包含有蛋白編碼序列的病毒 粒子能夠產(chǎn)生，并啟動(dòng)蛋白表達，同時(shí)蛋白表達將被T7終止子序列的作用下終止蛋白翻譯。對pET44a載體的單鏈測序可以使用COLIDOWN primer.
把表達的基因插入到載體的PshAI或者SmaI限制性?xún)惹忻肝稽c(diǎn)時(shí)，可以通過(guò)EK蛋白酶或者Thrombin蛋白酶將融合表達的Nus標簽完全切除。
質(zhì)粒只保證關(guān)鍵序列正確，不保證表達效果。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請下載：
ZK184pET-44a大腸表達質(zhì)粒.txt
