■ 基本信息
別名: | pET25b |
啟動(dòng)子: | T7 |
復制子: | pBR322 |
終止子: | T7 terminator |
質(zhì)粒分類(lèi): | 大腸桿菌質(zhì)粒；大腸表達質(zhì)粒；pET系列質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 5547bp |
質(zhì)粒標簽: | N-pelB, C-HSV, C-6×His |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養條件: | 37℃，有氧，LB |
表達宿主: | BL21(DE3)等大腸桿菌 |
誘導方式: | IPTG或乳糖及其類(lèi)似物 |
5'測序引物: | T7：TAATACGACTCACTATAGGG |
3'測序引物
| T7-ter：TGCTAGTTATTGCTCAGCGG
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備注: | 分泌表達 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達,分泌表達 |
片段類(lèi)型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pET-25b質(zhì)粒是一種原核表達載體，C端含有一個(gè)6×His標簽、HSV標簽，N端含有一個(gè)pelB前導肽。該質(zhì)粒含有多個(gè)常用的酶切位點(diǎn)，便于不同基因克隆。表達由宿主細胞提供的T7 RNA聚合酶誘導，目的基因被克隆到質(zhì)粒載體上，受噬菌體強轉錄及翻譯信號控制。pET25b載體的單一的多克隆位點(diǎn)見(jiàn)上面的環(huán)狀質(zhì)粒圖譜。注意：載體序列是以pBR322質(zhì)粒的編碼規矩進(jìn)行編碼的，所以T7蛋白表達區在質(zhì)粒圖譜上面是反向的。T7 RNA聚合酶啟動(dòng)的克隆和表達區域在質(zhì)粒圖譜中也被標注了出來(lái)。質(zhì)粒的F1復制子是被定向的，所以在T7噬菌體聚合酶的作用下，包含有蛋白編碼序列的病毒 粒子能夠產(chǎn)生，并啟動(dòng)蛋白表達，同時(shí)蛋白表達將被T7終止子序列的作用下終止蛋白翻譯。
pET系統是有史以來(lái)在大腸桿菌中表達重組蛋白的功能最強大的系統，也是現今原核表達方面使用最廣泛的系統。該系列質(zhì)粒能很容易的通過(guò)降低誘導物的濃度來(lái)削弱蛋白表達。在非誘導條件下，可以使目的基因處于完全沉默狀態(tài)而不轉錄。
質(zhì)粒只保證關(guān)鍵序列正確，不保證表達效果。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請下載：
ZK156pET-25b大腸表達質(zhì)粒.txt
