■ 產(chǎn)品介紹
菌株為銅綠假單胞菌，凍存管磁珠保存。
培養條件：營(yíng)養瓊脂、細菌保存培養基或胰酪胨大豆瓊脂培養基；35℃ 培養24—48小時(shí)。保存溫度：2-8℃。如需保存，則挑取單菌落接種至細菌保存培養基斜面，每月轉接1次，5代后應銷(xiāo)毀。
■ 產(chǎn)品保存原理
凍存管里的小瓷珠表面多孔，細菌可以很方便的吸附在上面。凍存管接種上細菌后，可放置于-20℃或-80℃環(huán)境中長(cháng)期保存（-20℃可保存一年，-80℃可保存二年）。當需要復蘇菌株時(shí)，可以很方便的從凍存管中取出單個(gè)的小瓷珠，直接接種到合適的細菌培養基上（平板培養基或液體培養基）。
■ 菌株復蘇
1、準備器材
相應的細菌增菌培養基、試管、接種環(huán)、試管架、鑷子、酒精燈、酒精棉、記號筆等。
2、菌株復蘇需要再無(wú)菌的條件下進(jìn)行，操作環(huán)境符合相關(guān)標準。
3、操作方法
3.1 根據不同菌株的生長(cháng)要求，配置相應的增菌液，分裝試管中進(jìn)行相應增菌液的滅菌溫度進(jìn)行滅菌，滅菌后在放置室溫備用。
3.2 菌種管開(kāi)啟方法：用浸過(guò) 75 ％酒精的脫脂棉擦凈菌種管；將菌種管頂端在火焰上加熱，注意避免直接加熱菌體或加熱過(guò)度。
3.3 接種方式
3.3.1 增菌肉湯的制備：取出凍存管并用力搖晃，使管內瓷珠分散。無(wú)菌條件下擰開(kāi)凍存管，用無(wú)菌的接種環(huán)（接種針）或鑷子取出1個(gè)小瓷珠，擰緊瓶蓋；將小瓷珠放置于滅菌后溫度在室溫的增菌液肉湯中。
3.3.2 劃線(xiàn)接種：將手持金屬接種環(huán)，用酒精燈將接種環(huán)（共約5 公分）燒至火紅，并不斷來(lái)回燒烤金屬固定桿之前約 10 公分，等待約10 秒鐘，將接種環(huán)前端輕觸培養基邊緣凝膠（無(wú)菌體部份），待接種環(huán)完全冷卻后，取出凍存管并用力搖晃，使管內瓷珠分散。無(wú)菌條件下擰開(kāi)凍存管，用無(wú)菌的接種環(huán)（接種針）取出1個(gè)小瓷珠或者菌液，擰緊瓶蓋；將小瓷珠在相應的固體培養基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的并行線(xiàn)，直到涵蓋1/3 培養基為止（I 區），灼燒接種環(huán)，待數秒冷卻后，旋轉培養基自 I 區涂布的邊緣再橫劃數條線(xiàn)到未接種的區域（II 區）， 重復的動(dòng)作完成 III 區與 IV 區。灼燒接種環(huán)，將接種環(huán)歸位。
3.4 盡可能快地將凍存管放回原來(lái)的保存環(huán)境，溫度過(guò)多改變將減弱細菌的生存能力；
3.5 培養箱中進(jìn)行增菌肉湯及平板的培養根據細菌的要求培養：
細菌要求在35+1℃培養，12~24小時(shí)；
真菌要求在25+1℃培養，24~48小時(shí)；
厭氧菌需要提供厭氧條件。
■ 菌株保存
1、瓷珠保存法：
1.1 使用前，用油性筆在每個(gè)凍存管上標記上細菌的名稱(chēng)，每支凍存管只可接種一種細菌；
1.2 在無(wú)菌條件下，打開(kāi)凍存管的螺旋瓶蓋；
1.3 用接種環(huán)挑取18-24小時(shí)新鮮細菌純培養物，放入凍存液中。擰緊瓶蓋，來(lái)回顛倒使細菌乳化，配成大約3-4麥氏比濁度的菌懸液，此時(shí)細菌懸液會(huì )吸附在小瓷珠內外表面；
1.4 用無(wú)菌移液器將凍存管中的菌懸液盡量吸出。（吸出的菌懸液應放入消毒液中并隨后進(jìn)行高壓滅菌處理）；
1.5 擰緊瓶蓋。記錄下接種細菌的詳細情況；
1.6 將接種完細菌的凍存管放在-20℃或-80℃冰箱中保存。
2、菌懸液保存法：
將復蘇好的試管的菌懸液，用滅菌好的甘油進(jìn)行封存后放置冰箱2~8℃進(jìn)行保存，保存時(shí)間為1個(gè)月。
3、斜面保存法：
將菌懸液用劃線(xiàn)方法進(jìn)行斜面的接種培養后，用滅菌后的甘油進(jìn)行保存放置冰箱2~8℃進(jìn)行保存，保存時(shí)間為1個(gè)月。
■ 保存條件
1、未經(jīng)使用的凍存管可在室溫保存12個(gè)月；已經(jīng)接種的凍存管在-20℃可保存12個(gè)月或-80℃可保存24個(gè)月；接種三次后冷藏保存，不可再冷凍保存；
2、在接種之前有如下情況產(chǎn)生，該凍存管不得使用：
a.瓶子有漏液情況發(fā)生；
b.凍存管內的凍存保護液混濁；
c.超過(guò)有效保存期。
3、小瓷珠一旦從凍存管中取出，不得再放回凍存管中；
4、當丟棄使用過(guò)的或部分使用過(guò)的凍存管時(shí)，應注意生物危險的預防。
5、廢棄液經(jīng)高壓滅菌后（121℃，30分鐘）丟棄。
■ 備注
1、菌株來(lái)源中國醫學(xué)微生物菌種保藏管理中心的菌株干粉，菌株干粉默認為零代，對干粉菌株進(jìn)行復活為第一代菌株，第一代菌株進(jìn)行傳代并保存為菌株的第二代即現在的磁珠。
2、菌株為第二代，保質(zhì)期6個(gè)月，如發(fā)現污染或不活等現象，請1個(gè)月內聯(lián)系我公司。
3、菌株操作應在無(wú)菌條件下進(jìn)行，防止雜菌污染。
4、本方法僅供參考，視情況可以通過(guò)其他合理途徑進(jìn)行傳代和保存。
5、本公司出售的菌株僅用于科研、教學(xué)及衛生微生物檢驗質(zhì)量控制。
