■ 產(chǎn)品介紹
Y2HGold菌株是Clontech公司開(kāi)發(fā)的GAL4系統酵母雙雜實(shí)驗用菌株，MATa型，可直接轉化質(zhì)?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過(guò)mating操作進(jìn)行蛋白互作驗證或篩庫試驗。Transformation marker為: trp1, leu2，報告基因為：AbAr, HIS3, ADE2, MEL1。 Y2HGold-GAL4酵母雙雜系統需要兩種質(zhì)粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。質(zhì)粒PGBKT7的篩選標志為T(mén)RP1，用于表達DNA-BD(來(lái)自酵母轉錄因子GAL4N端1~174位氨基酸)與目標蛋白(Bait)的融合蛋白；質(zhì)粒PGADT7的篩選標志為L(cháng)EU，用于表達AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)與目標蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4系統原理：一個(gè)完整的酵母轉錄因子GAL4可分為功能上相互獨立的兩個(gè)結構域：位于N端1~174位氨基酸區段的DNA結合域（DNA-BD）和位于C端768~881位氨基酸區段的轉錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并與之結合。而AD可以啟動(dòng)UAS下游的基因進(jìn)行轉錄。BD和AD單獨存在不能激活轉錄，但當二者接近時(shí)，則呈現完整的GAL4活性，使含有UAS的啟動(dòng)子下游基因轉錄表達。正常條件下，BD不與AD結合，將要檢測的蛋白質(zhì)分別與BD和AD融合，形成bait 融合蛋白（bait-BD）和prey融合蛋白（prey-AD），如果bait和prey發(fā)生相互作用，就會(huì )促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，從而激活報告基因的轉錄。 Y2HGold有四個(gè)報告基因：AbAr, HIS3, ADE2, MEL1，分別由三種不同的啟動(dòng)子（G1，G2，M1）啟動(dòng)，這三種啟動(dòng)子只有GAL4識別的17bp核心區相同，其余部分均不同，大大降低了酵母雙雜假陽(yáng)性發(fā)生的概率。此外新報告基因AbAr與以前的營(yíng)養缺陷報告基因相比具有更低背景的優(yōu)點(diǎn)，也可以降低酵母雙雜假陽(yáng)性發(fā)生的概率。 |
基因型： | MATa,trp1-901,leu2-3,112,ura3-52,his3-200,gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3,GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2URA3: :MEL1UAS-Mel1TATAAUR1-C MEL1 |
■ 基本信息
培養基: | YPD/YPDA |
菌株類(lèi)別: | 酵母菌 |
培養條件: | 28℃，有氧，YPD/YPDA |
質(zhì)粒轉化: | 電激/42℃熱激 |
保存方式: | 30%甘油，-80℃ |
基本應用: | 用于酵母雙雜交 |
■ 使用方法
收到菌液及時(shí)四區劃線(xiàn)活化，挑取單克隆在YPD中培養到生長(cháng)對數中后期加入終濃度30%無(wú)菌甘油保種，分裝置于-80℃保存，避免反復化凍。建議超凈臺內劃線(xiàn)涂板，避免雜菌污染。
■ 注意事項
1. 酵母菌在YPD培養基上會(huì )變粉，是正?，F象，可以由此特性鑒別是否為酵母菌。
2. 酵母菌種化凍1-2次活性下降，不建議直接長(cháng)期保存。
3. 活化保種的種管建議分裝保存，反復凍融菌株活力下降。
4. 本產(chǎn)品僅可用于實(shí)驗室研究，不能用于動(dòng)物，人體以及作為食品添加劑等用途。
5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
