■ 產(chǎn)品介紹
SURE（Stop Unwanted Rearrangement Events）感受態(tài)細胞是設計用來(lái)克隆在傳統菌株中無(wú)法克隆的DNA片段序列的菌株。SURE感受態(tài)菌株缺乏催化重組和刪除非標準二級結構和三級結構， 例如十字形（由反向重復序列導致）和Z字形的DNA序列的組件。這些非標準二級結構和三級結構在真核細胞中經(jīng)常出現，而且這些結構能夠阻礙真核細胞DNA 在傳統菌株中的克隆。sure感受態(tài)細胞是限制性?xún)惹忻戈幮缘?McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-)，核酸內切酶（endA）缺陷，和重組酶(recB recJ)缺陷的。同時(shí)sure感受態(tài)細胞中所具有的F' 游離基因上面的lacIqZΔM15基因，使得能夠利用藍白斑進(jìn)行克隆篩選。 |
基因型： | E. coli B e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (KanR) uvrC [F' proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR)]. |
■ 產(chǎn)品特點(diǎn)
SURE感受態(tài)細胞主要是用來(lái)克隆不穩定DNA結構，大腸桿菌DNA修復系統會(huì )針對重復序列、二級結構（如Z-DNA）等真核DNA進(jìn)行重排或刪除修飾。SURE感受態(tài)細胞針對uvrC,umuC,SbcC和RecJ等參與修飾的大腸桿菌基因或蛋白進(jìn)行突變，提高了真核來(lái)源、不規則DNA的穩定性達20倍以上，并且適合克隆甲基化DNA。
本身具有Kana和Tet抗性。當轉化氯霉素抗性質(zhì)粒到sure感受態(tài)細胞中時(shí)，一定要用100μg/ml的氯霉素平板去篩選。因為sure感受態(tài)細胞在40μg/μl的氯霉素條件下具有抗性，而對于100μg/μl的氯霉素抗生素具有敏感性。
sure感受態(tài)細胞可以用于藍白斑篩選，具有laz互補基因。
在載體構建過(guò)程中，我們經(jīng)常會(huì )遇到一些基因片段具有高度的重復，這導致插入載體中的序列可能會(huì )在細菌擴增中不穩定，在質(zhì)粒擴增中產(chǎn)生形成片段的缺失和重排，如發(fā)現插入片段高頻率地產(chǎn)生缺失和重排，可以嘗試使用重組缺陷大腸桿菌菌株，例如sure感受態(tài)細胞。
■ 使用方法
建議超凈臺內劃線(xiàn)涂板，得到單克隆后再進(jìn)行其他實(shí)驗操作，避免雜菌污染。
■ 注意事項
1. 本產(chǎn)品僅可用于實(shí)驗室研究，不能用于動(dòng)物，人體以及作為食品添加劑等用途。
2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
3. 使用甘油菌時(shí)可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固體瓊脂平板即可，也可完全融解后使用，但隨著(zhù)凍融次數的增加，菌株的活力會(huì )逐漸下降。
