■ 產(chǎn)品介紹
AH109菌株來(lái)源于PJ69-2A 酵母菌株，將lacZ報告基因引入PJ69-2A誕生了AH109，此菌株是Clontech公司開(kāi)發(fā)的GAL4系統酵母雙雜實(shí)驗用菌株，MATa型，可直接轉化質(zhì)?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過(guò)mating操作進(jìn)行蛋白互作驗證或篩庫試驗。Transformation marker為：trp1，leu2，報告基因為：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1。AH109-GAL4酵母雙雜系統需要兩種質(zhì)粒配套使用：pGBKT7和pGADT7。質(zhì)粒pGBKT7的篩選標志為T(mén)RP1，用于表達DNA-BD(來(lái)自酵母轉錄因子GAL4N端1~174位氨基酸)與目標蛋白(Bait)的融合蛋白；質(zhì)粒pGADT7的篩選標志為L(cháng)EU，用于表達AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)與目標蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4系統原理：一個(gè)完整的酵母轉錄因子GAL4可分為功能上相互獨立的兩個(gè)結構域：位于N端1~174位氨基酸區段的DNA結合域 (DNA-BD)和位于C端768~881位氨基酸區段的轉錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并與之結合。而AD可以啟動(dòng)UAS下游的基因進(jìn)行轉錄。BD和AD單獨存在不能激活轉錄，但當二者接近時(shí)，則呈現完整的GAL4活性，使含有UAS的啟動(dòng)子下游基因轉錄表達。正常條件下，BD不與AD結合，將要檢測的蛋白質(zhì)分別與BD和AD融合，形成 bait融合蛋白(bait–BD)和 prey融合蛋白 (prey-AD)，如果bait和prey發(fā)生相互作用，就會(huì )促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，從而激活報告基因的轉錄。AH109有四個(gè)報告基因：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1，分別由三種不同的啟動(dòng)子(GAL1，GAL2，MEL1)啟動(dòng)，這三種啟動(dòng)子只有GAL4識別的17bp核心區相同，其余部分均不同，大大降低了酵母雙雜假陽(yáng)性發(fā)生的概率。 |
基因型： | MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3, MEL1 GAL2UAS- GAL2TATA-ADE2, URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ |
■ 基本信息
培養基: | YPDA |
菌株類(lèi)別: | 酵母菌 |
培養條件: | 28℃，有氧，YPDA |
質(zhì)粒轉化: | 化轉、電轉 |
保存方式: | 30%甘油，-80℃ |
基本應用: | 酵母雙雜交 |
■ 使用方法
建議超凈臺內劃線(xiàn)涂板，得到單克隆后再進(jìn)行其他實(shí)驗操作，避免雜菌污染。
■ 注意事項
1. 本產(chǎn)品僅可用于實(shí)驗室研究，不能用于動(dòng)物，人體以及作為食品添加劑等用途。
2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
3. 使用甘油菌時(shí)可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固體瓊脂平板即可，也可完全融解后使用，但隨著(zhù)凍融次數的增加，菌株的活力會(huì )逐漸下降。
