產(chǎn)品介紹:

KM71H是畢赤酵母菌株，屬于真核細胞。一般的針對原核生物的抗生素例如卡那和氨芐對酵母是無(wú)效的，因此為了防止大腸桿菌等原核生物對酵母培養菌株污染，往往會(huì )在培養基中加入一些氨芐和卡那霉素的抗生素，來(lái)抑制細菌菌的污染和生長(cháng)。畢赤酵母適宜的生長(cháng)溫度是28至30℃，溫度超過(guò)32℃對蛋白的表達是有害的，并可能導致細胞的死亡。KM71H畢赤酵母被推薦用來(lái)表達含有Zeocin抗性的載體載體重組質(zhì)粒，例如pPICZ A,B,C系列的載體。在篩選KM71H重組轉化菌株時(shí)，Zeocin抗生素的工作濃度是100μg/ml。

KM71H宿主菌中的AOX1基因含有一個(gè)片段缺失，當pPICZ A,B,C或者pPICZα A,B,C轉化到KM71H中時(shí)只能產(chǎn)生出MutS轉化株，不必在進(jìn)行Mut基因型的篩選了。KM71H的來(lái)源母細胞在精氨琥珀酸裂解酶基因(arg4)含有一個(gè)突變，這使得菌株無(wú)法在不含有精氨酸的培養基中生長(cháng)。而KM71H酵母細胞中在A(yíng)OX1基因處插入了一個(gè)正常的arg4基因，從而形成了KM71H的MutS, Arg+表型。將約2kb的Arg4基因克隆出來(lái)后插入到KM71H來(lái)源菌株內的野生型的AOX1基因的BamH I（16 bp）和Sal I（227 bp）中間，從而構建成功KM71H。ARG4基因直接替換了AOX1基因的16-227片段序列。KM71H畢赤酵母細胞的優(yōu)點(diǎn)是不需要利用甲醇minimal media篩選菌株的Mut基因型，因為所有的轉化株都是MutS菌株。另外，AOX1基因并沒(méi)有被完全刪除，理論上你可以用自己的基因替換其中的Arg4基因，從而生成MutS, Arg-的轉化株，但是由于實(shí)驗表明該基因型酵母菌株在含有精氨酸的minimal media上并不能很好的生長(cháng)，所以并不鼓勵大家進(jìn)行這種基因替換嘗試。

基因型：aox1::ARG4, arg4，表型：MutS, Arg+。