DNA片段連接往往用于基因操作過(guò)程。傳統T4 DNA Ligase連接方法連接時(shí)間長(cháng)達16小時(shí),而且反應常常受到DNA末端結構的影響。我公司的Quick DNA Ligation Kit 通過(guò)改造T4 DNA Ligase及其相應的緩沖體系,達到完美的高速高效連接;將反應時(shí)間縮短在5-10min,并且不受DNA末端結構的影響。
■ 產(chǎn)品特點(diǎn)
·實(shí)現5min快速連接。
·連接效率高。
·不受DNA末端結構影響,適用廣泛。
建議反應體系(10μl反應體系):
名稱(chēng)
| 加入量
|
Vector
| xμL*1
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PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物
| yμL*2
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ddH2O
| 補足至7μL
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5×Quick Ligation Buffer
| 2μL
|
T4 DNA Ligase ( 5 Weiss Units/μL )
| 1μL*3
|
注解:*1:一般載體加入量為10-100ng。
*2:片段與載體摩爾比在3:1~7:1之間,連接效果最好。
*3:T4 DNA Ligase應最后加入反應體系。
如果使用5ul體系連接,各成分按照比例減半使用,連接效率不變。
加完試劑后,用移液器輕輕吹打混勻或者輕彈管底混勻,低速瞬時(shí)離心收集所有液體在離心管底。
室溫(20℃-30℃)連接5分鐘。