■ 產(chǎn)品特點(diǎn)
★配備9對隨即引物,一次性獲得的未知序列,結果真實(shí)性達9999%。
★高擴增性: 擴增成功率、產(chǎn)物特異性、產(chǎn)量均有顯著(zhù)提高。
★長(cháng)片段擴增性: 最長(cháng)步移可達3.2kb,通常情況下,一次可步移1.5 kb左右;而T公司的染色體步移試劑盒只能步移200-500bp。
★提高工作效率:巧妙引物設計(免去了酶切和加接頭等繁瑣的實(shí)驗步驟), 12小時(shí)即可完成PCR擴增到轉化克隆的全過(guò)程。干一天的工作等于以往三天的工作量。
■ 產(chǎn)品說(shuō)明
染色體步移技術(shù)(Genome Walking)是一種重要的分子生物學(xué)研究技術(shù),使用這種技術(shù)可以有效獲取與已知序列相鄰的未知序列。染色體步移技術(shù)主要有以下幾方面的應用:
1.根據已知的基因或分子標記連續步移,獲取人、動(dòng)物和植物的重要調控基因,可以用于研究結構基因的表達調控。如分離克隆啟動(dòng)子并對其功能進(jìn)行研究;
2.步查獲取新物種中基因的非保守區域,從而獲得完整的基因序列;
3.鑒定T-DNA或轉座子的插入位點(diǎn),鑒定基因槍轉基因法等轉基因技術(shù)所導致的外源基因的插入位點(diǎn)等;
4.用于染色體測序工作中的空隙填補,獲得完整的基因組序列;
5.用于人工染色體PAC、YAC和BAC的片段搭接。
對于基因組測序已經(jīng)完成的少數物種(如人、小鼠、線(xiàn)蟲(chóng)、水稻、擬南芥等)來(lái)說(shuō),可以輕松地從數據庫中找到某物種已知序列的側翼序列。但是,對于大多數生物而言,在不了解它們的基因組序列以前,想要知道一個(gè)已知區域兩側的 DNA 序列,只能采用染色體步移技術(shù)。
以PCR技術(shù)為基礎的染色體步移的主要問(wèn)題是在預先不了解未知區域序列信息的情況下,如何設計兩個(gè)特異性引物來(lái)擴增未知區域。而傳統的染色體步移方法,如:反向 PCR 法、連接接頭法等,都有操作復雜、非特異性擴增、連接效率低等弊端。
本試劑盒是一種根據已知基因組 DNA 序列,高效獲取側翼未知序列的試劑盒。相對于其它傳統方法,本試劑盒具有高效、簡(jiǎn)便、特異性高、靈敏度高、一次性獲得的未知序列較長(cháng)等特點(diǎn)。其主要原理是根據已知DNA序列,分別設計三條同向且退火溫度較高的特異性引物(SP Primer),與試劑盒中提供的四種經(jīng)過(guò)獨特設計的退火溫度較低的兼并引物,即 ZFP1、ZFP2、ZFP3、ZFP4、ZFP5、ZFP6、ZFP7、ZFP8、ZFP9進(jìn)行熱不對稱(chēng) PCR 反應。通常情況下,其中隨機選四種至少有一種兼并引物可以與特異性引物之間利用退火溫度的差異進(jìn)行熱不對稱(chēng) PCR 反應,通過(guò)三次巢式PCR 反應即可獲取已知序列的側翼序列。如果一次實(shí)驗獲取的長(cháng)度不能滿(mǎn)足實(shí)驗要求時(shí),還可以根據第一次步移獲取的序列信息,繼續進(jìn)行側翼序列獲取。此外,本試劑盒中還含有 Control DNA 及 Control Primer,可以方便進(jìn)行 Control 實(shí)驗。