本公司生產(chǎn)的Origami(DE3)感受態(tài)細胞是采用特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,可用于DNA的化學(xué)轉化。使用pUC19質(zhì)粒檢測,轉化效率高達106cfu/μg DNA以上。
基因型為:Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsLF′[lac+ lacIq pro] (DE3)gor522::Tn10 trxB (KanR, StrR, TetR)
■ 產(chǎn)品特點(diǎn)
Origami系列菌株是由K-12菌株衍生而來(lái),在thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)基因上同時(shí)含有突變,這使得該菌株能夠更加高效的在細胞質(zhì)內生成二硫鍵,有助于含二硫鍵蛋白的活性蛋白形成。研究表明使用Origami系列的感受態(tài)細胞表達獲得的活性二硫鍵蛋白比其他同類(lèi)感受態(tài)細胞要多10倍左右。
Origami系列感受態(tài)細胞能夠用于氨芐抗性質(zhì)粒的蛋白表達,尤其是和pET32a載體能夠完美搭配使用。pET32a載體含有thioredoxin (TRX)融合標簽,能夠高效提升胞質(zhì)內蛋白二硫鍵的形成。
TrxB和Gor基因突變使得質(zhì)粒能夠分別具有卡那和四環(huán)素抗性,所以本菌株無(wú)法用于卡那和四環(huán)素抗性質(zhì)粒的蛋白表達。為了減少細胞內多種分子間的二硫鍵的形成,含有TrxB和Gor基因突變的宿主菌被建議用于含二硫鍵正確折疊 蛋白的高效表達。
DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5啟動(dòng)子下攜帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于pET系列載體,及其他T7啟動(dòng)子系列載體。
亮氨酸缺陷型菌株。