產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
用 LiAc 轉化法進(jìn)行酵母轉化時(shí)，會(huì )通過(guò)使用 carrier DNA，選用對數期的酵母菌，優(yōu)化質(zhì)粒 DNA 的質(zhì)量和濃度等方法來(lái)提高轉化效率。YPD Plus 用于轉化后復蘇酵母菌，可以有效提高轉化效率 50-100%。
使用方法:（轉化步驟具體可參考購買(mǎi)感受態(tài)使用說(shuō)明或者感受態(tài)制備試劑盒，轉化步驟反應體積可能略有差異）
一、1.5 mL 體系：
1、在含有約 1 μg 質(zhì)粒的 1.5 mL 無(wú)菌離心管中，加入 5 μL 預變性的 Carrier DNA，50 μL 酵母感受態(tài)細胞，350 μL LiAc/PEG3350 混合液輕柔混勻。
2、30℃水浴或者金屬浴 30 min，每 10 min 混勻一次。
3、每管加入 20 μL DMSO，輕柔混勻。
4、42℃水浴熱激 15 min，每 5 min 上下顛倒混勻一次。
5、1000 g 離心 5 min。
6、棄掉上清，用 1 mL YPD PlusLiquid Medium 重新懸浮，30℃搖床震蕩培養 30-60 min。
7、1000 g 離心 5 min。加入 1 mL 無(wú)菌 0.9%NaCl 重懸菌體。
8、分別稀釋 10 倍，100 倍后涂布于相應的缺陷型培養基上。
9、30℃恒溫培養 3-5 天。
二、15 mL 體系：
1、在含有約 5-15 μg 質(zhì)粒的 15 mL 無(wú)菌離心管中，加入 20 μL 預變性的 Carrier DNA，600 μL 酵母感受態(tài)細胞，2.5 mL LiAc/PEG3350 混合液輕柔混勻。
2、30℃水浴 45 min，每 10 min 混勻一次。
3、每管加入 160 μL DMSO，輕柔混勻。
4、42℃水浴熱激 20 min，每 5 min 上下顛倒混勻一次。
5、1000 g 離心 5 min。
6、棄掉上清，用 3 mL YPD Plus Liquid Medium 重新懸浮，30℃搖床震蕩培養 90 min。
7、1000 g 離心 5 min。根據實(shí)驗需求加入相應體積的無(wú)菌 0.9%NaCl 重懸菌體。
8、涂布于相應的缺陷型培養基上。
9、30℃恒溫培養 3-5 天。
儲存條件:
-20℃儲存，有效期 12 個(gè)月。
