產(chǎn)品說(shuō)明:
X-α-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-吡喃半乳糖苷）是α-半乳糖苷酶（MEL1）的顯色反應底物，更為常見(jiàn)的X-Gal是β-半乳糖苷酶（LacZ）的顯色反應底物。α-半乳糖苷酶可水解無(wú)色的X-α-Gal底物，并生成藍色的產(chǎn)物。通過(guò)肉眼可見(jiàn)的藍白斑篩選，可快速而簡(jiǎn)便的識別陽(yáng)性克隆。
MEL1是GAL4酵母雙雜交系統的一個(gè)報告基因，編碼外泌型的α-半乳糖苷酶。如果蛋白無(wú)互作，報告基因MEL1不表達，菌落呈乳白色；如果蛋白發(fā)生互作，報告基因MEL1表達，菌落呈藍色，亦可根據菌落藍色深淺，初步判斷蛋白互作強度。
X-α-Gal與缺陷型篩選平板同時(shí)使用，可有效提高篩選效率，排除假陽(yáng)性克隆，主要應用于酵母雙雜交實(shí)驗GAL4酵母表達系統中蛋白互做的陽(yáng)性克隆的檢測。也可用于篩選含α-半乳糖苷酶基因細菌菌株；區分腸桿菌科內的不同菌種，以及區分雙歧桿菌和乳酸菌；組織化學(xué)中用于酶活性的檢測等。
母液配制:
X-α-Gal母液（20 mg/mL）：取20 mg X-α-Gal溶于1 mL DMF，或等比例放大，過(guò)濾除菌。
使用方法:
涂布于預制平板：
1. 用DMF稀釋X-α-Gal母液至4 mg/mL?；蛉芙?4 mg X-α-Gal于6 mL DMF，終濃度為4 mg/mL。
2. 涂布200 μL（φ15 cm） 或者100 μL（φ10 cm）X-α-Gal儲存液于預制平板上；
3. 置于37 ℃培養箱至液體被吸收（DMF揮發(fā)性差，最長(cháng)可放4小時(shí)）；
4. 將轉化細菌或酵母涂于平板上，于37 ℃或30 ℃培養直至藍色菌斑出現。
直接加入培養基：
1. 將已滅菌固體培養基冷卻至50-55 ℃；
2. 100 mL固體培養基加入100-200 μL X-α-Gal母液混勻，快速倒平板。
攜帶MEL1基因的酵母菌株：
Y2HGold、Y190、AH109、Y187、PG69-2A。
儲存條件:
-20 ℃避光儲存，未開(kāi)封有效期12個(gè)月。
