本產(chǎn)品為預混的含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、反應緩沖液、mg2+、PCR反應增強劑以及穩定劑等成分的2×PCR體系,使用時(shí)只需加入DNA模板和引物,并用水補足體積。本產(chǎn)品具有快速簡(jiǎn)單、靈敏度高、特異性強、穩定性好等優(yōu)點(diǎn),可最大限度地減少人為誤差、節約PCR實(shí)驗操作時(shí)間、降低污染幾率。含有染料,在PCR反應完成后,產(chǎn)物不需添加上樣緩沖液即可直接進(jìn)行電泳,也可純化回收后用于酶切、克隆、測序等后續反應。選用的Pfu DNA聚合酶具有比Taq酶更高的耐熱活性,98℃時(shí)1小時(shí)后可保留90%以上的酶活性。具有5’-3’ DNA聚合酶活性和3’-5’外切核酸酶活性(校正活性),pfu酶是目前已發(fā)現的所有耐高溫DNA Polymerase中出錯率最低的。在PCR反應中,pfu DNA Polymerase延伸速度為0.5-1 kb/分鐘,產(chǎn)物3’端為平端,可用平端載體克隆。
■ 適用范圍
1.高保真基因克?。喝缁虮磉_克隆、基因定點(diǎn)突變、細胞內基因點(diǎn)突變分析(SNP)和平末端補平等。
2.復雜DNA模板(如GC含量高,二級結構)的擴增 。
3.PCR產(chǎn)物3’ 端附?jīng)]有突出的“A”堿基,純化后可用于平端克??;若用于T/A克隆,需加A后方可使用。
4.大量高保真需求的基因克?。喝鏲DNA文庫的建立等。
■ 質(zhì)量控制
經(jīng)檢測無(wú)外源核酸酶活性;PCR方法檢測無(wú)宿主殘余 DNA ;能有效地擴增人基因中的單拷貝基因;室溫存放一周,無(wú)明顯活性改變。