產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品以總RNA或miRNA為模板,先通過(guò)Poly(A)聚合酶在miRNA的3`端加多聚A尾,隨后使用Universal Oligo(dT) Primer進(jìn)行逆轉錄反應,最終生成miRNA對應的cDNA第一鏈。
產(chǎn)品特點(diǎn)
操作簡(jiǎn)單:在一管中即可同時(shí)完成加尾和逆轉錄。
特異性強:POLY(A)聚合酶特異性識別單鏈miRNA,最大限度降低miRNA前體的逆轉錄;逆轉錄引物設計為莖環(huán)結構,減少了PCR時(shí)的非特異性擴增。
逆轉錄效率高:逆轉錄酶無(wú)RNase H活性,具有更高的逆轉錄效率和靈敏度。
產(chǎn)品應用
以總RNA或miRNA為模板,進(jìn)行加A尾法逆轉錄,產(chǎn)物用于RT-PCR、熒光定量PCR。
實(shí)驗案例
1、一步完成加尾和逆轉錄反應。

2、優(yōu)異的逆轉錄特異性
以水稻miRNA為模板,使用本產(chǎn)品與某T公司和某V公司同類(lèi)產(chǎn)品進(jìn)行反轉錄,得到的cDNA進(jìn)行熒光定量檢測osa-miR156a??梢钥吹?,使用本產(chǎn)品得到的融解曲線(xiàn)為單峰,同類(lèi)產(chǎn)品得到的融解曲線(xiàn)為雙峰。
3、優(yōu)異的靈敏度和穩定性
使用本產(chǎn)品反轉錄小鼠肝miRNA,之后用熒光定量檢測hsa-miR-30a-3p。結果顯示,反轉錄產(chǎn)物的靈敏度和穩定性均良好。
擴增曲線(xiàn) | 融解曲線(xiàn)
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小鼠肝miRNA濃度:226ng/uL,取1 uL反轉錄(反轉錄體系:20 μL),將cDNA原液分別稀釋101-105,取2 μL 進(jìn)行qPCR,q-PCR試劑:2×HQ SYBR qPCR Mix (Without ROX)熒光定量試劑(ZF501)。